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    DNA提取技術(shù)服務(wù)到底是怎么樣的呢?

    發(fā)布時(shí)間: 2022-11-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1254次
     
      DNA提取技術(shù)服務(wù)是一種使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母細(xì)胞壁,然后采用一種新型的酵母質(zhì)粒純化柱實(shí)現(xiàn)從酵母細(xì)胞中進(jìn)行小量質(zhì)粒快速抽提的試劑盒。
      DNA提取技術(shù)服務(wù)本實(shí)驗(yàn)方法的基本原理是,在高鹽狀態(tài)下,硅膠膜專一性地吸附DNA;而在低鹽或水溶液狀態(tài)下,DNA被洗脫下來(lái)。此法簡(jiǎn)便快捷,可在30分鐘內(nèi)同時(shí)提純二十多個(gè)樣品。從3~5ml培養(yǎng)過(guò)夜的含高拷貝質(zhì)粒的菌液中可以獲得10~20μg高純度的質(zhì)粒DNA,用于酶切、轉(zhuǎn)化、DNA自動(dòng)測(cè)序和手工測(cè)序等。
      DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有硅質(zhì)材料、陰離子交換樹(shù)脂等。
      DNA提取方法:
      1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速離心后取上清,所得DNA大小為100-150kb
      2、甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
      3、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
      4、異丙醇沉淀法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
      5、表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。
      6、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。
      7、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。
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