TUNEL染色
簡單介紹:
TUNEL染色即原位末端轉移酶標記技術,是分子生物學與形態學相結合的研究方法。具體而言,當凋亡細胞的DNA雙鏈斷裂或一條鏈出現缺口時,會產生一系列3’-OH末端。在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和sehngwusu或熒光素(FITC)所形成的衍生物標記到DNA的3′末端,從而進行凋亡細胞的檢測。
基本原理:
其原理是熒光素(fluorescein)標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過氧化物酶(HRP,horse-radish peroxidase)的熒光素抗體特異性結合,后者又與HRP第五二氨基聯苯胺(DAB)反應產生很強的顏色反應(呈深棕色),特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在光學顯微鏡下即可觀察凋亡細胞。由于正常的或正在增值的細胞幾乎沒有DNA斷裂,因而沒有3’-OH形成,很少能夠被染色。TUNEL細胞凋亡試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片)在單細胞水平上的凋亡原位檢測。
特點:
1、高靈敏度:可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,同時由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。
2、特異性好:TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞。
3、快速:實驗流程可以在較短時間內完成。
4、應用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
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