腺病毒(Adenovirus)是直徑約80-120 nm的無包膜的線性雙鏈DNA病毒,可迅速感染分裂和非分裂期細胞,與細胞表面受體結合后通過內吞作用進入細胞,在細胞核孔附近聚集,并在感染后2h將腺病毒的DNA釋放到細胞核中并開始蛋白表達。通過對野生腺病毒進行改造,保留包裝信號序列,去除病毒蛋白的編碼序列,不僅增加外源基因的裝載容量,而且降低細胞毒性和機體免疫反應,從而獲得安全性更高的基因導入系統。
腺病毒包裝系統的特點:不整合到宿主細胞基因組、無插入致突變性、可進行有效擴增、獲得高滴度高純度的腺病毒。
腺病毒的優勢
1. 是研究原代非增殖細胞基因表達的系統:腺病毒感染細胞后,1-2天即可表達,是研究原代非增殖細胞基因表達的系統。
2. 滴度高:腺病毒系統在轉有E1基因的HEK293細胞中可進行自我復制,可產生滴度為1010~1011PFU/mL的病毒。
3. 載體容量大:可容納不超過5kb的片段。
4. 不整合到染色體中,無插入致突變性:腺病毒除卵細胞以外,幾乎在所有已知細胞中都不整合到染色體中,因此避免了因整合而引發的潛在的基因突變和隨機效應。
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