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腦出血小鼠模型構建

腦出血小鼠模型構建

簡要描述:
腦出血小鼠模型構建主要用于模擬人類腦出血的病理生理過程,以便深入研究腦出血的發病機制、治療策略及評估新藥的效果。這種模型在神經科學研究領域具有廣泛的應用價值。

更新時間:2024-09-26

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廠商性質:其他

一、腦出血背景簡介

腦出血(ICH)是指非外傷性腦實質內血管破裂引起的出血,占據全部腦猝中疾病的20%~30%,腦出血急性期死亡率高達30%~40%。腦出血發病年齡趨于年輕化,嚴重危害了人們的身心健康。腦出血發病的原因有很多,主要和腦血管的病變有關,同時和高血脂、糖尿病、高血壓、血管的老化、吸煙等因素密切相關,是腦血管類疾病中發病急、致死、致殘率高的一類腦血管疾病。


二、腦出血動物模型簡介

腦出血動物模型主要用于模擬人類腦出血的病理生理過程,以便深入研究腦出血的發病機制、治療策略及評估新藥的效果。這種模型在神經科學研究領域具有廣泛的應用價值。

三、腦出血小鼠模型構建方法

3.1實驗動物

小鼠

3.2實驗材料

膠原酶,立體定位儀  shlq 注射器

3.3腦出血小鼠模型構建方法

目前開展科學研究的常用腦出血模型包括四種:膠原酶注射腦出血模型,自體血注入腦出血模型,微球囊充盈腦出血模型,高血壓性腦出血模型

3.31膠原酶注射腦出血模型

膠原酶分為多型,目前研究認為IV型Ⅶ型用于腦出血建模最恰當。
造模方法:SD 大鼠麻醉消毒后固定,顱骨轉孔,使用立體定位儀定位大鼠腦一側尾狀核,將微量注射器針頭插入腦組織尾狀核,分別分組注入0.5μL膠原酶,連續觀察10 min后即可見發生出血,且出血后癥狀明顯、持續時間較長。
優點:方法簡單、快捷、成功率較高,出血穩定性好,并可多次重復;其能較好地模擬人體腦血管自發出血的生理生化過程以及出后血腫持續擴大的病理變化過程。
缺點:膠原酶并不能造成血管的物理性破裂,實際上是造成了小血管的廣泛慢性滲血,形成的血液滲出灶并不是真正意義上的局限的血腫,急性占位效應不明顯,與人類腦出血的病理過程仍有區別。另外,膠原酶本身可造成腦組織嚴重的炎癥反應,并且對血管有廣泛的破壞作用,這些不良作用可對腦出血后單純由血腫形成的炎癥反應研究產生干擾。另外,膠原酶對腦組織有細胞毒性作用,可嚴重損傷神經功能及血腦屏障,因此并不能wq模擬人類單純腦出血后二次損傷的病理生理狀態,不能用來研究腦出血后血腫周圍組織血液循環障礙,有一定的局限性。
應用:適用于評估腦出血后各類指標的長期觀察。

3.32自體血局部注入法

①單步注射法該方法是抽取動物自身一定量血液通過定位技術注入該動物腦尾狀核造成該部位血腫的一種建模方法,自體血尾狀核注射腦出血模型是目前較為理想的腦出血模型。
造模方法:麻醉并固定動物后,動物顱骨局部轉孔,取選定腦組織局部注射動物非肝素化自體血,注血量與動物腦組織大小相關(腦鼠注血量分別為25 μl、50 μl和100 μl,分別相當于人腦20 ml、40 ml和80 ml的出血量)。
但是自體血注入法存在注血過程中血液逆流現象,影響了血腫大小形成的穩定性。由于尾狀核較為致密,注血時局部壓力較高,而新鮮凝固的xk強度很低,很難抵抗血腫膨脹的壓力,無法從根本上解決血液逆流的難題。
優點:由于造模方法操作簡單,特別是應用立體定向儀后,動物的死亡率明顯降低,且血腫位置更加精確,除有不可避免的穿刺針道損傷外無其他異體物質和雜質,故該模型的病理過程更接近人的自發性腦出血
缺點:模型都不能呈現良好的可重復性,且造成的血腫體積不穩定,成功率較低,同時有出現腦室及硬膜下間隙之間破裂出血和注射的血液返流等情況。

②兩步注射法由于單步注射法存在較多的缺陷,現在常用的方法是兩步注射法,提高了成功率的同時減少了血液的返流。
造模方法:先注射15 μL自體血,后靜置針頭7 min,使血凝塊形成將針道封堵,再注射余下35 μL。
優點:除了一步注射法的優點外,還能有效地減少針道反流的血量,較好地控制了血腫的大小、形態及部位。并且可以觀察血液凝固過程中局部腦組織的病理生理變化,此方法與人腦出血后演進過程基本相似,可用于研究腦水腫機制及臨床藥物作用機制。
缺點:注入腦內的血腫并非血管破裂造成的。血液注射過程中不可避免地有反溢現象和血液凝固堵塞針道的問題,血腫形態和大小重復性差。
注意:自體血常取材于實驗動物的內眥、股動脈、心臟等處。內眥取血血液標本不易被污染,但取血為靜脈血,與腦動脈出血的血液成分不符。動脈穿刺法血液成分與腦出血成分較一致。但股動脈穿刺法操作較復雜,成功率低。心臟穿刺法同樣可以得到純凈的動脈血,操作較簡便,損傷較小,但對操作人員技術要求較高,需熟練的操作技巧,反復穿刺動物又容易導致動物失血、感染死亡。

3.33自發性腦出血法此模型是研究成人型腦出血較理想的模型。
目前有實驗采用基因培育方法培育出具有易出血的高血壓基因動物,該動物自出生起數周開始血壓自發升高,短時間內可發生自發性腦出血。這類動物也常用大鼠,是在已有高血壓基因大鼠的基礎上近親繁殖培育,其相對于祖代血壓更高,自發性腦出血發生率達80% ,發生出血的部位主要在大腦前內側皮質、枕皮質和基底節。
優點:此模型將高血壓與腦卒中結合,相似度jg地模擬人腦卒中病理。
缺點:這類動物只代表腦出血的一小部分原因—高血壓,且動物培養成本高昂,繁育時間較長,動物體弱飼養困難,繁育的后代模型容易出現斷種、變種、基因突變的情況,應用受到一定限制。

3.34微球囊充脹法造模方法:先將大鼠顱骨特定部位轉孔,然后將固定在針頭部位的微球囊通過該孔插入大腦尾狀核頭部,在20s內注入微球囊50mL液體,保留10min,觀察微球囊對腦組織的壓迫作用,然后回抽微球囊內液體,通過不斷變化微球囊體積模擬不同大小血腫對腦組織的壓迫作用。
缺點:微球囊并非血液成分,研究者并沒有考慮腦出血后血腫的血液成分對腦組織的細胞毒性作用,血腫的腦細胞毒性作用的研究是人類需要解決的重要問題,因此近年來的腦出血研究基本上已摒棄了此方法??偨Y無論哪種方法建立動物腦出血模型均存在各自的優缺點。隨著基礎醫學及各種新技術的不斷發展,許多新的腦出血建模方法不斷出現,但仍有缺陷,需要不斷的研究和改進。建立標準化腦出血動物模型已成為研究者共同追求的目標,建模過程的各處理因素和影響因素統一化,減少對實驗結果的影響,盡可能與人類腦出血的發病過程、病理生理過程趨向一致將是一個長期探索的過程。


四、模型驗證

4.1病理HE染色:顯微鏡下觀察腦組織的結構和病理變化

4.2生化檢測:檢測血液中的炎癥因子、凝血功能指標等,以了解腦出血后機體的生化反應。

五、小結

無論哪種方法建立動物腦出血模型均存在各自的優缺點。隨著基礎醫學及各種新技術的不斷發展,許多新的腦出血建模方法不斷出現,但仍有缺陷,需要不斷的研究和改進。建立標準化腦出血動物模型已成為研究者共同追求的目標,建模過程的各處理因素和影響因素統一化,減少對實驗結果的影響,盡可能與人類腦出血的發病過程、病理生理過程趨向一致將是一個長期探索的過程


六、參考文獻

[1] VAN MATREET,SHERMANDS,KISERTH.Man-agementofintracerebralhemorrhage??useofstatins[J].VascHealthRiskManag,2016,12:153-161.

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