瑞氏-吉姆薩病理實驗
瑞氏色素是酸性染料伊紅(Eosin)和堿性染料yajialan(Methylene Blue)組成的復合染料, 對原生質的染色有很好的區別作用。吉姆薩染液由天青2與伊紅混合而成,染色原理和結果與瑞氏染色法基本相同,姬姆薩染色液對胞漿著色力較強,能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別是對血液和骨髓細胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒,著色清晰,但是對胞核著色偏深,核結構顯色不佳,常與故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯合使用。
實驗步驟
?涂片制備?:
取細胞懸液進行離心,棄去上清液。
加入適量PBS緩沖液,混勻后取適量滴于載玻片前端。
用推片呈30-40°角均勻用力向另一端平穩地推出,制備成細胞涂片。
將涂片放置自然晾干。
?染色?:
對于血涂片,可用組化筆沿著載玻片的邊緣畫一個大的長方形,以便后續觀察。其他細胞涂片則無需此步驟。
滴加適量瑞氏染液,完quan覆蓋細胞,染色1分鐘。
用純水沖洗組織上的染液,直至玻片流水呈無色。
滴加吉姆薩染色液,染色30秒(可用洗耳球輕輕吹打至染液完quan覆蓋細胞)。
滴加瑞氏-吉姆薩C溶液(或D溶液),染色一定時間(根據實驗需要調整)。
再次用純水沖洗組織上的染液,直至玻片上流水呈無色。
?觀察與封片?:
稍微甩下載玻片上多余的水份,用顯微鏡快速觀察染色效果。
染色完成后,將涂片置于65℃烤箱烘烤4小時以上進行固定。
使用二甲苯進行透明處理,然后用中性樹膠封片。
實驗結果判讀
在顯微鏡下觀察,不同類型的細胞會呈現出不同的染色特征。例如:
紅細胞數量多,體積小,無核,呈粉色或肉粉色。
嗜中性粒細胞體積略大于紅細胞,細胞核呈紫藍色分葉狀,細胞質幾乎無色。
嗜酸性粒細胞體積略大于嗜中性粒細胞,細胞核呈紫色,通常為2葉,細胞質充嗜酸性顆粒呈紅色。
嗜堿性粒細胞體積略小于嗜酸性粒細胞,細胞質內有大小不等被染成紫色的嗜堿顆粒,核1-2葉,胞質染成淡藍色。
淋巴細胞圓形,體積與紅細胞相似,核致密染成深紫色。
單核細胞體積大,細胞質染成灰藍色,核呈腎型或馬蹄型染成紫藍色。
注意事項
制作良好的涂片要求厚薄適宜,分布均勻,邊沿整齊。
制作的涂片需要充分干燥以防脫片。
染色時間可根據染液濃度、室溫高低、細胞多少來進行調節。
瑞氏-吉姆薩病理實驗經常用于血液和細胞涂片、骨髓細胞涂片、細菌染色。細胞質呈紅色,細胞核及細菌呈藍色,嗜酸性顆粒呈橘紅色。染液中加中性甘油,防止甲醇揮發或氧化,同時也可使血細胞染色較清晰。