穩轉株篩選實驗

穩轉株篩選實驗目的:

 穩轉株長用于基因研究方向，便于長期觀察和檢驗基因對于細胞功能以及蛋白的相互作用。

一般轉染實驗方法：

用轉染質粒或病毒侵染的方法將構建好的含靶基因的載體導入細胞，根據不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應的試劑進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎上，得到單細胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩定轉染細胞株。

一般篩選方法：

1、轉染質粒后，單克隆方法篩選穩定細胞系

對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過表達，如果轉染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質粒轉染無法滿足。

另外，質粒游離于細胞質中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質粒轉染整合幾率極低，穩定細胞株構建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。

2、病毒感染篩選穩定細胞株

病毒感染方法較質粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株，由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發生基因重排，是制備穩定細胞株的理想載體。

服務內容：1、穩定：15代以內細胞穩定表達。

      2、迅速：一般控制在1個月以內完成構建。

      3、經濟：價格實惠。

      4、質量：對外源基因進行嚴格鑒定。

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